Набір магнітної пробопідготовки ДНК NeoPrep DNA Magnet plant (пробопідготовка ГМО-рослина)

Набір реагентів NeoPrep DNA Magnet, розроблений фахівцями Лабораторії НЕОГЕН, призначений для швидкого виділення ДНК з крові, гомогенатів тканин, гомогенатів рослинного походження, інших біологічних рідин. NeoPrep DNA Magnet може використовуватися фахівцями з молекулярної генетики і ДНК-діагностики у науково-дослідних і клінічних лабораторіях.

Принцип дії NeoPrep DNA Magnet заснований на використанні Lysing soln., який призначений для лізису клітин, солюбілізації клітинного дебрису, а також для денатурації клітинних   сорбція ДНК на NeoSorb (R) (магніточутливий сорбент), потім згідно з протоколом виділення вона легко відмивається від протеїнів, солей та інших домішок відмивочним реагентом. Кінцевим етапом виділення ДНК є її десорбція з поверхні NeoSorb (R) в розчин ExtraDNA soln. (буфер для елюції ДНК). Отримана ДНК може бути використана за призначенням без додаткового очищення або іншої обробки. ДНК, виділена зі свіжого біологічного матеріалу, є високомолекулярною - 40-50 тис.п.н. Вихід чистої ДНК із цільної крові становить 2-4 мкг з 100 мкл рідкого гомогенату.

*Для роботи необхідний магнітний штатив

1.  ПРИЗНАЧЕННЯ

1.1. Набір реагентів NeoPrep¹⁰⁰ DNA Magnet_plant призначено для швидого виділення ДНК з  cухих подрібнених зразків, гомогенатів рослинного похождення і інших біологічних зразків рослин.

1.2.  Набір реагентів  NeoPrep¹⁰⁰ DNA_plant може використовуватись в науково-дослідних лабораторіях спеціалістами по молекулярній генетиці і ДНК-діагностиці.

1.3. Час виділення ДНК из 2-12  проб близько 1 години.

1.4. Набір розраховано  на 100 зразків вагою 50-100 міліграм (або об’ємом до 100 мкл).

2.  ПРИНЦИП  ДІЇ

Набір реагентів  NeoPrep¹⁰⁰ DNA в основі своєї дії використовує Lysing soln., який призначено для лізісу клітин, солюбілізації клітинного дебрісу, а також для денатурації клітинних нуклеаз. В присутності Lysing soln.  ДНК сорбується на NeoSorb (W) (сорбент), далі легко відмивається від білків і солі Buffer soln.. Отримана ДНК може бути використана по призначенню без додаткової очистки чи обробки.

3.  АНАЛІТИЧНІ  ХАРАКТЕРИСТИКИ

3.1. ДНК, що виділена зі свіжого біологічного матеріалу, є  високомолекулярною

 – 40-50 тис.н.п..

3.2. Набір реагентів забезпечує високу чистоту і якість ДНК - ОD 260/280 нм  1,6-2,0.

3.3. Маса чистої ДНК  складає 2-4 мкг.

4.  ЗАСТЕРЕЖЕННЯ

4.1. Всі компоненти набору в наданих концентраціях є нетоксичними.

4.2. При роботі з набором реагентів слід використовувати  гумові рукавички, тому що в складі готового Lysing soln. міститься сильний хаотропний агент.

4.3. Для запобігання контамінації від одного зразка до іншого  рекомендуємо працювати із застосуванням наконечників для дозаторів зі спеціалізованими протиаерозольними  фільтрами.

5.  СКЛАД НАБОРУ

Lysing soln. (Лізуючий розчин) – 2x30 мл.

Buffer soln. ( Cольовий буфер) – 6x50 мл.

NeoSorb (R) (Суспензія магніточутливого сорбенту) – 2x1 мл.

ЕxtraDNA soln. (буфер для елюції ДНК) – 10 мл.

6.  МАТЕРІАЛИ І ОБЛАДНАННЯ

6.1. Термостат твердотілий зразка ТТ-48(ТТ-12) для мікропробірок, що підтримує температуру 65 °С.

6.2.  Магнітний штатив типу NeoMag-12

6.3.  Міні-ротатор зразка РВ-24(РВ-12).

6.4.  Центрифуга-вортекс МС-3500(МС2400).

6.5.  Дозатори автоматичні ( від 10 мкл до 1 мл).

6.6.  Відсмоктувач вакуумний зразка ВВ-1.

6.7  Пробірки і наконечники для дозаторів, також з протиаерозольними фільтрами.

6.8.  Рукавички гумові.

7.  ПРОТОКОЛ  ВИДІЛЕННЯ  ДНК

7.1. В  пробірку  об’ємом 1,5 мл налити  400 мкл  Lysing soln., потім додати 150 міліграм (100 мкл) зразка (сухий подрібнений матеріал, гомогенат свіжої рослини чи інш.),  і перемішати вміст пробирки перевертанням (5-10 разів).

7.2. Термостатувати пробірку з сумішшю 30 хв. при температурі 65 °С. (При необхідності збільшення виходу ДНК під час термостатування кілька разів перемішати вміст перевертанням пробірки). Потім центрифугувати пробірку з сумішшю 30 сек  при 3500 об/хв.

7.3. Акуратно відібрати супернатант в об"ємі від 100 до 300 мкл (не зачіпаючи осаду!) і перенести в чисту пробірку 1,5 мл. В  пробірку додати 20 мкл суспензії сорбенту NeoSorb (R) та перемішати на ротаторі чи вручну на протязі 10 хв.

7.4. Помістити пробірку з сумішшю на 15 сек  в магнітний штатив.

7.5. Обережно, не зачіпаючи осад, видалити супернатант  за допомогою вакуумного відсмоктувача.

7.6  Додати в пробірку 1 мл  буферу Buffer soln.  та 200 мкл  Lysing soln.

7.7.  Перемішати вміст пробірки на вортексі.

   Примітка: Якщо суспендування ускладнено (за великого навантаження ДНК) через сильне злипання сорбенту, то потрібно спочатку  обережно суспендувати дозатором, а потім   перемішати на вортексі.

7.8.  Помістити пробірку з сумішшю на 15 сек  в магнітний штатив.

7.9.  Обережно видалити супернатант, не зачіпаючи осад, за допомогою вакуумного відсмоктувача.

7.10.  Додати в пробірку 1 мл Buffer soln., перемішати вміст пробірки на вортексі, поставити пробірку на 15 сек  в магнітний штатив і видалити супернатант  за допомогою вакуумного відсмоктувача.

7.11. Повторити пункт 7.10.

7.12. Посушити осад при температурі 65 °С протягом 2-3 хв.

7.13.  Додати в пробірку 100 мкл  ExtraDNA soln. і ретельно перемішати вміст пробірки на вортексі.

7.14. Термостатувати у твердотілому термостаті 5 хв при 65 °С. Під час термостатування 2-3 рази обережно размішати на вортексі.

7.15.  Помістити пробірку з сумішшю на 15 сек  в магнітний штатив.

    7.16. Перенести 80-90 мкл чистого супернатанту з ДНК в пробірку для зберігання або відразу використати для  PCR.  ДНК зберігати при температурі  мінус 20 °С.  В реакцію рекомендовано додавати 5-10 мкл ДНК.

Увага! Сорбент для виділення ДНК може інгібувати реакцію ПЛР!!!

Написати відгук

Ваше Ім’я:

Рейтинг

Добре
entry_bads
Ваш відгук:
Добавить фото

Ссылка на фото:

Введіть код, вказаний на зображенні:

Продовжити