Набір реагентів NeoPrep Elution DNA, розроблений фахівцями Лабораторії НЕОГЕН, призначений для швидкого елюції ДНК з агарозного гелю. NeoPrep Elution DNA може використовуватися фахівцями з молекулярної генетики і ДНК-діагностики у науково-дослідних і клінічних лабораторіях. Набір також може використовуватись для швидкої очистки екстрактів ДНК, отриманими класичними чи іншими методами, для очищення ПЛР-продукту від надлишку праймерів, димерів праймерів та dNTP для зміни буферу
Тривалість елюції нуклеїнових кислот становить всього 20 хв, що значно полегшує працю і економить робочий час лаборанта.
Принцип дії NeoPrep Elution DNA заснований на використанні Solubilizing reagent., який призначений для солюбілізації агарозного гелю. У середовищі розчинів Solubilizing reagent і Buffer soln. (реагент відмивочний) відбувається сорбція ДНК на NeoSorb (W), потім згідно з протоколом виділення вона легко відмивається від залишок агарозного гелю та інших домішок відмивочним реагентом. Кінцевим етапом виділення ДНК є її десорбція з поверхні NeoSorb (W) в розчин ExtraDNA soln. (буфер для елюції ДНК). Отримана ДНК може бути використана за призначенням без додаткового очищення або іншої обробки. Втрати ДНК при елюції складають не більше 20%. . Набір найбільш ефективно працює при елюції ДНК розміром від 200 до 20000 н.п.
1. ПРИЗНАЧЕННЯ
1.1. Набір реагентів NeoPrep Elution DNA призначений для швидкої елюції ДНК з агарозних гелей. Набір також може використовуватись для швидкої очистки екстрактів ДНК, отриманими класичними чи іншими методами, для очищення ПЛР-продукту від надлишку праймерів, димерів праймерів та dNTP для зміни буферу.
1.2. Набір реагентів NeoPrep Elution DNA може використовуватись в науково-дослідних лабораторіях спеціалістами по молекулярній генетиці і ДНК-діагностиці.
1.3. Час виділення ДНК из 4-8 зрізів гелей проб близько 20 хвилин.
1.4. Набір розраховано для елюції 50 зразків гелів об’ємом 100 мкл(100 мг).
2. ПРИНЦИП ДІЇ
Набір реагентів NeoPrep Elution DNA в основі своєї дії використовує Solubilizing reagent. В присутності Solubilizing reagent агарозний гель солюбілізується, а ДНК активно сорбується на NeoSorb (R) (сорбент), далі легко відмивається від супутніх домішок Buffer soln.. Отримана ДНК може бути використана в гено-інженерних реакціях або для прямого секвенування по Сенгеру.
3. АНАЛІТИЧНІ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Набір реагентів NeoPrep Elution DNA забезпечує високу чистоту і якість ДНК - ОD 260/280 нм 1,6-2,0.
3.3. Втрати ДНК при елюції складають не більше 20%. Набір найбільш ефективно працює при елюції ДНК розміром від 200 до 20000 н.п.
4. ЗАСТЕРЕЖЕННЯ
4.1. Всі компоненти набору в наданих концентраціях є нетоксичними.
4.2. При роботі з набором реагентів слід використовувати гумові рукавички, тому що в складі готового Lysing soln. міститься сильний хаотропний агент.
4.3. Для запобігання контамінації від одного зразка до іншого рекомендуємо працювати із застосуванням наконечників для дозаторів зі спеціалізованими протиаерозольними фільтрами.
5. СКЛАД НАБОРУ
Solubilizing reag. (Cолюбілізуючий реагент) – 1х40 мл.
Buffer soln. ( Cольовий буфер) – 2x50 мл.
NeoSorb (W) (Суспензія магніточутливого сорбенту) – 1x1,5 мл.
ЕxtraDNA soln. (буфер для елюції ДНК) – 1х5 мл.
6. МАТЕРІАЛИ І ОБЛАДНАННЯ
6.1. Термостат твердотілий зразка ТТ-48(ТТ-12) для мікропробірок, що підтримує температуру 65 °С.
6.2. Мікроцентрифуга, що має швидкість до 10000 g
6.3. Міні-ротатор зразка РВ-24(РВ-12).
6.4. Центрифуга-вортекс МС-3500(МС2400).
6.5. Дозатори автоматичні ( від 10 мкл до 1 мл).
6.6. Відсмоктувач вакуумний зразка ВВ-1.
6.7 Пробірки і наконечники для дозаторів, також з протиаерозольними фільтрами.
6.8. Рукавички гумові.
7. ПРОТОКОЛ ВИДІЛЕННЯ ДНК
7.1. Помістити зріз агарозного гелю об’ємом до 100-150 мг (не більше 150 мг!) у пробірку 1,5 мл і додати 800 мкл Solubilizing reag.
7.2. Термостатувати пробірку з сумішшю 3-5 хв. при температурі 65 °С. При цьому зріз гелю ДНК повинен повністю розчинитися в Solubilizing reag. !!!
7.3. При кімнатній температурі в пробірку додати 20-30 мкл суспензії сорбенту NeoSorb (W). . Попередньо сорбент ретельно перемішати на вортексі!!!
7.4. Перемішати пробірку на ротаторі або вручну на протязі 5-7 хв. Постійне перемішування на ротаторі сприяє максимальній сорбції ДНК на NeoSorb (W).
7.5 Центрифугувати пробірку з сумішшю 10 сек при 5000 g., обережно видалити супернатант не зачіпаючи осаду, за допомогою вакуумного відсмоктувача.
7.6 Додати в пробірку 1 мл буферу Buffer soln та перемішати вміст пробірки на вортексі 5-15 секунд до гомогенного стану.
Примітка: Якщо суспендування ускладнено (за великого навантаження ДНК) через сильне злипання сорбенту, то потрібно спочатку обережно розпушити сорбент наконечником, а потім перемішати на вортексі.
7.8. Центрифугувати пробірку з сумішшю 10-15 сек при 5000 g.
7.9. Обережно видалити супернатант, не зачіпаючи осаду, за допомогою вакуумного відсмоктувача.
7.10. Повторити пункти 7.6 - 7.9.
7.11. Посушити осад при температурі 65 °С протягом 3-4 хв.
7.12. Додати в пробірку 100 мкл ExtraDNA soln. і ретельно перемішати вміст пробірки піпетуванням.
7.13. Термостатувати у твердотілому термостаті 5 хв при 65 °С.
7.14. Центрифугувати 2 хвилини при 10000 g.
7.15. Перенести прозорий супернатант з ДНК в чисту пробірку для зберігання або відразу використати. ДНК зберігати при температурі мінус 20 °С.
lab.neogene@ukr.net
lab.neogene