Набір для електрофорезу ELА-50 призначений для проведення горизонтального електрофорезу фрагментів нуклеїнових кислот розміром від 200 п.н. до 22 000 п.н. в агарозному гелі. Розрахований в середньому на 100 стандартних зразків.
Комплектація набору: ТВЕ 10х (буфер для електрофорезу - 50 мл
Agarose (агароза) 1 флакон - 3 г
BE Dye (етидіум бромід, флуоресцентний барвник для
нуклеїнових кислот) 1 пробірка - 150 мкл
Інструкція по використанню - 1шт.
Умови зберігання - в темному місці при кімнатній температурі.
Термін зберігання - 1 рік.
НАБІР РЕАГЕНТІВ
для проведення електрофорезу в агарозному гелі.
10хTBE buffer (буфер для електрофорезу) - 2 флакони, 25 мл;
Agarose ( агароза), - 1 флакон, 3г;
BE Dye (N етідіум бромід, фарба), готова до застосування - 1 пробірка, 90 мкл.
УВАГА Всі роботи з етідіум бромідом проводити в рукавичках. При потраплянні на шкіру - негайно змити великою кількістю води !
Усі компоненти наборів реагентів можна зберігати при температурі 2-250С протягом 1 року від дня випуску.
1. Приготування робочого розчину буферу для електрофорезу (ТВЕ)
У мірну колбу (циліндр) на 1000 мл внести вміст флаконів з буфером для електрофорезу (10хТВЕ), довести до мітки дистильованою водою й ретельно перемішати. ТВЕ буфер використовується також і для приготування агарозного гелю. Готовий ТВЕ буфер може зберігатися при кімнатній температурі протягом 2 місяців.
! При виявленні осаду в концентраті буферу потрібно прогріти його до температури 65-1000 С до повного розчинення!!
2. Приготування агарозного гелю.
У конічну колбу на 500 мл внести вміст флакона з агарозою, додати 200 мл готового ТВЕ буфера й помістити колбу на електричну плитку. Довести вміст колби до кипіння й після того, як агароза повністю розплавиться, колбу з агарозою зняти із плитки. Готова агароза повинна бути прозорою й не повинна містити нерозплавлених часток.
* Примітка: Для швидкого готування агарози можна використати мікрохвильову піч
(2 хв при “високій потужності”).
3. Підготовка електрофоретичної камери до заливання агарозного гелю.
Установити кришку з ванночкою на камеру, а платформу для заливання гелю помістити у ванночку. Установити гребінку на платформу.
4. Розплавлену агарозу остудити приблизно до 500С у теплій воді або на столі при кімнатній температурі. Потім у колбу з готовою агарозою внести 30 мкл етідіума броміду й обережно перемішати вміст колби рівномірними обертовими рухами.
5. Агарозу налити на платформу. Товщина шару агарози повинна бути близько 4 мм.
6. Після застигання агарози (приблизно через 20-25 хв) обережно, щоб не порвати кишені, вийняти гребінку, а платформу із застиглим агарозним гелем перенести з ванночки в електрофоретичну камеру.
7. Додати ТВЕ буфер в електрофоретичну камеру так, щоб буфер покривав агарозний гель шаром приблизно 2-3 мм.
8. Відібрати 10 мкл продукту ампліфікації з-під Масла й додати у відповідну лунку агарозного гелю, обережно, щоб запобігти перетеканню з однієї кишені в іншу.
9. Установити кришку на камеру, підключити електрофоретичну камеру до джерела живлення й установити на джерелі живлення напругу 100-200 В (не більше 15 В/см).
10.Через 20-30 хв (приблизно 0,5 см прогону синьої фарби) електрофоретичну камеру
відключити від джерела живлення, від’єднати дроти від камери, зняти кришку з
електрофоретичної камери.
11.Вийняти платформу з агарозним гелем з електрофоретичної камeри, дати рідини
стекти з гелю й обережно промити агарозний гель дистильованою водою.