Про компанію Новини Оплата та доставка КонтактиВхід Реєстрація

Набір пробопідготовки ДНК NeoPrep DNA plant (пробопідготовка ГМО-рослина)

Код товару: NeoPrep_plant
Наявність: На складі

Опис Інструкція Специфікація Відгуки (0)

Набір реагентів NeoPrep DNA, розроблений фахівцями Лабораторії НЕОГЕН, призначений для швидкого виділення ДНК з крові, гомогенатів тканин, гомогенатів рослинного походження, інших біологічних рідин. NeoPrep¹⁰⁰ DNA може використовуватися фахівцями з молекулярної генетики і ДНК-діагностики у науково-дослідних і клінічних лабораторіях.

Тривалість виділення нуклеїнових кислот становить всього 45 хв, що значно полегшує працю і економить робочий час лаборанта.

Принцип дії NeoPrepDNA заснований на використанні Lysing soln., який призначений для лізису клітин, солюбілізації клітинного дебрису, а також для денатурації клітинних нуклеаз. У середовищі розчинів Lysing soln. і Buffer soln. (реагент відмивочний) відбувається сорбція ДНК на NeoSorb (W), потім згідно з протоколом виділення вона легко відмивається від протеїнів, солей та інших домішок відмивочним реагентом. Кінцевим етапом виділення ДНК є її десорбція з поверхні NeoSorb (W) в розчин ExtraDNA soln. (буфер для елюції ДНК). Отримана ДНК може бути використана за призначенням без додаткового очищення або іншої обробки. ДНК, виділена зі свіжого біологічного матеріалу, є високомолекулярною - 40-50 тис.п.н. Вихід чистої ДНК із цільної крові становить 2-4 мкг з 100 мкл рідкого гомогенату.

1. ПРИЗНАЧЕННЯ

1.1. Набір реагентів NeoPrep100 DNA_plant призначено для швидого виділення ДНК з cухих подрібнених зразків, гомогенатів рослинного похождення і інших біологічних зразків рослин.

1.2. Набір реагентів NeoPrep100 DNA_plant може виористовуватись в науково-дослідних лабораторіях спеціалістами по молекулярній генетиці і ДНК-діагностиці.

1.3. Час виделення ДНК из 2-12 проб близько 1 години.

1.4. Набір розраховано на 100 зразків вагою 50-100 міліграм (або об’ємом до 100 мкл).

2. ПРИНЦИП ДІЇ

Набір реагентів NeoPrep100 DNA в основі своєї дії використовує Lysing soln., який призначено для лізісу клітин, солюбілізації клітинного дебрісу, а також для денатурації клітинних нуклеаз. В присутності Lysing soln. ДНК сорбується на NeoSorb (W) (сорбент), далі легко відмивається від білків і солі Buffer soln.. Отримана ДНК може бути використана по призначенню без додаткової очистки чи обробки.

3. АНАЛІТИЧНІ ХАРАКТЕРИСТИКИ

3.1. ДНК, що виділена зі свіжого біологічного матеріалу, є високомолекулярною

– 40-50 тис.н.п..

3.2. Набір реагентів забезпечує високу чистоту і якість ДНК - ОD 260/280 нм 1,6-2,0.

3.3. Маса чистої ДНК складає 2-4 мкг.

4. ЗАСТЕРЕЖЕННЯ

4.1. Все компоненти набору в наданих концентраціях є нетоксичними.

4.2. При роботі з набором реагентів слід використовувати гумові рукавички, тому що в складі готового Lysing soln. міститься сильний хаотропний агент.

4.3. Для запобігання контамінації від одного зразка до іншого рекомендуємо працювати із застосуванням наконечників для дозаторів зі спеціалізованими протиаэрозольними фільтрами.

5. СКЛАД НАБОРУ

Lysing soln. (Лізуючий розчин) – 2x30 мл.
Buffer soln. ( Cольовий буфер) – 6x50 мл.
NeoSorb (W) (Суспензія сорбенту) – 2x1 мл.
ЕxtraDNA soln. (буфер для елюції ДНК) – 10 мл.

6. МАТЕРІАЛИ І ОБЛАДНАННЯ

6.1. Термостат твердотілий зразка ТТ-48(ТТ-12) для мікропробірок, що підтримує температуру 65 °С.

6.2. Мікроцентрифуга, що має швидкість до 5000 g.

6.3. Міні-ротатор зразка РВ-24(РВ-12).

6.4. Центрифуга-вортекс МС-3500(МС2400).

6.5. Дозатори автоматичні ( від 10 мкл до 1 мл).

6.6. Відсмоктувач вакуумний зразка ВВ-1.

6.7 Пробірки і наконечники для дозаторів, також з протиаэрозольними фільтрами.

6.8. Рукавички гумові.

7. ПРОТОКОЛ ВИДІЛЕННЯ ДНК

7.1. В пробірку об’ємом 1,5 мл налити 400 мкл Lysing soln., потім додати 150 міліграм (100 мкл) зразка (сухий подрібнений матеріал, гомогенат свіжої рослини чи інш.), і перемішати вміст пробирки перевертанням (5-10 разів).

7.2. Термостатувати пробірку з сумішшю 30 хв. при температурі 65 °С. (При необхідності збільшення виходу ДНК під час термостатування кілька разів перемішати вміст перевертанням пробірки). Потім центрифугувати пробірку з сумішшю 30 сек при 5000 g.

7.3. Акуратно відібрати супернатант в об"ємі від 100 до 300 мкл (не зачіпаючи осаду!) і перенести в чисту пробірку 1,5 мл. В пробірку додати 20 мкл суспензії сорбенту NeoSorb (W) та перемішати на ротаторі чи вручну на протязі 10 хв.

7.4. Центрифугувати пробірку з сумішшю 30 сек при 5000 g.

7.5. Обережно, не зачіпаючи осаду, видалити супернатант за допомогою вакуумного відсмоктувача.

7.6 Додати в пробірку 1 мл буферу Buffer soln. та 200 мкл Lysing soln.

7.7. Перемішати вміст пробірки на вортексі.

Примітка: Якщо суспендування ускладнено (за великого навантаження ДНК) через сильне злипання сорбенту, то можливо спочатку вначале обережно суспендувати дозатором, а потім перемішати на вортексі.

7.8. Центрифугувати 10 сек при 5000 g.

7.9. Обережно видалити супернатант, не зачіпаючи осаду, за допомогою вакуумного відсмоктувача.

7.10. Додати в пробірку 1 мл Buffer soln., перемішати вміст пробірки на вортексі, центрифугувати 10 сек при 5000 g і видалити супернатант за допомогою вакуумного відсмоктувача.

7.11. Повторити пункт 7.10.

7.12. Посушити осад при температурі 65 °С протягом 2-3 хв.

7.13. Додати в пробірку 100 мкл ExtraDNA soln. і ретельно перемішати вміст пробірки на вортексі.

7.14. Термостатувати у твердотілому термостаті 5 хв при 65 °С. Під час термостатування 2-3 рази обережно размішати на вортексі.

7.15. Центрифугувати 1 хвилину при 5000 g.

7.16. Перенести 80-90 мкл чистого супернатанту з ДНК в пробірку для зберігання або відразу використати для PCR. ДНК зберігати при температурі мінус 20 °С. В реакцію рекомендовано додавати 5-10 мкл ДНК.

Увага! Сорбент для виділення ДНК може інгібувати реакцію ПЛР!!!