Neo-Gene_F5 G1691A (Лейден)

Набір призначений для ідентифікації мутації G1691A в гені коагуляційного фактора 5 (Лейденівська мутація), що є білковим кофактором при утворенні тромбіну з протромбіну.

Мутація викликає заміну амінокислоти Arg на Gln в позиції 506, що викликає стійкість фактора 5 до розщеплення С-білком.

Підвищення рівня фактора 5 в крові збільшує ризик розвитку венозних тромбозів, інфаркту міокарда та інсультів, а також цілий ряд ускладнень вагітності, порушень розвитку плоду, пізніх токсикозів .

1. Перед проведенням реакції вийняти з холодильника потрібну кількість пробірок з сухими реакційними сумішами з праймерами (Мастермікс).
2. Промаркувати відповідним чином необхідну кількість пробірок Мастермікс, включаючи (-) контроль.
3. Додати в усі пробірки по 10 мкл ПЛР-буфера.
4. Внести в пробірки по 7 мкл деіонізованної води.
5. Додати у відповідні пробірки по 3 мкл (20-200 нг) досліджуваної ДНК, не зачіпаючи сорбент, або негативний контроль. В якості (-) контролю слід використовувати бідистил. воду або той розчинник, в якому розчинена досліджувана ДНК. Сумарний обсяг реакційної суміші - 20 мкл. Обережно пропіпетувати готову суміш для кращого перемішування компонентів.
6. Увага! Для запобігання контамінації при роботі з досліджуваними і контрольними зразками рекомендується використовувати спеціальні наконечники з анти-аерозольними фільтрами.
7. Перенести пробірки в термоблок програмованого термостата і запустити наступну програму ампліфікації:
   
   
8. Після закінчення ампліфікації усі пробірки перенести в кімнату для проведення електрофорезу (детекції) ДНК. 5-10 мкл ПЛР продукту використовувати для аналізу гель-електрофорезом без додаткового розведення фарбою для нанесення. Для візуалізації продуктів ампліфікації використовувати 2% агарозному гель.
9. В якості Маркера, за допомогою якого слід візуально визначити приблизні розміри смуг, рекомендується використовувати маркер молекулярної маси pUC19 / MspI (2,5 - 3 мкл в лунку).

Обробка результатів ампліфікації

1. Наявність смуги на рівні 240 п.о. вказує на присутність в пробі варіанта G в положенні 1691 гена фактора V (аргінін в положенні 506 білкового ланцюга), що відповідає нормі.
2. Наявність смуги на рівні 121 п.о. вказує на присутність в пробі варіанта А в положенні 1691 гена фактора V (глутамін в положенні 506 білкового ланцюга), що відповідає мутації.
3. Наявність смуг як на рівні 240 п.о. так і на рівні 121 п.о. вказує на присутність в пробі обох алельних варіантів G і А в положенні 1691 гена фактора V (R / Q в положенні 506 білкового ланцюга), що відповідає гетерозиготному носія мутації в гені фактора V.
4. Крім смуг, відповідних алельним варіантам гена FV на електрофореграммі присутня смуга 306 п.о., що є внутрішнім контролем (К) реакції ампліфікації.
5. Відсутність будь-яких смуг, в тому числі і відповідних контролю, вказує на інгібування реакції. Дослідження слід повторити при оптимальних умовах проведення ПЛР.

Написати відгук

Ваше Ім’я:

Рейтинг

Добре
entry_bads
Ваш відгук:
Добавить фото

Ссылка на фото:

Введіть код, вказаний на зображенні:

Продовжити