Про компанію       Новини       Оплата та доставка       КонтактиВхід    Реєстрація
  
Набір реагентів для генотипування головного комплексу гістосумісності генів II класу HLA-DR  методом полімеразної ланцюгової реакції

Набір реагентів для генотипування головного комплексу гістосумісності генів II класу HLA-DR методом полімеразної ланцюгової реакції

Виробник NEOGENE
Код товару: HLA_DR_II
Наявність: На складі
Опис Інструкція Відгуки (0)

Генотипування головного комплексу гістосумісності генів II класу

HLA-DR  методом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР)

 

(ІНСТРУКЦІЯ)

 

Методика використовує сіквенс-специфічну реакцію ПЛР (PCR-SSP), яка працює при повній сумісності послідовності праймеру з послідовністю матриці  аллелі гену, що ампліфікується. 

Комплектація набору

Mix №№ 1-19  – безбарвні пробірки з ліофілізованими праймерами - по 55  пробірок кожного номеру, загалом 1045 пробірок  (відповідність номеру Міксу алельному варіанту або групі алелів дивитись в табл.2); зберігати при +4 °С

ПЛР-буфер          -  2,2  мл;                            - зберігати при -20 °С

MgCl2                      -  2,2   мл.                          - зберігати при -20 °С

Суміш dNTP (10mM) – 0,44 мл                     - зберігати при -20 °С

Tag-полимераза (5ед/мкл)      - 0,22 мл    - зберігати при -20 °С  

Протокол  проведення  ПЛР.

  1. Перед початком реакції дістати з холодильника потрібну кількість ПЛР-пробірок з праймерами, по одній на кожен зразок ДНК відповідно.
  2. Промаркувати відповідним чином необхідну кількість пробірок, в тому числі і (-) контроль.
  3. Додати в усі пробірки по 18 мкл ПЛР-суміші, приготовану в співвідношенні, як приведено в таблиці. Кількість реактивів приведно з розрахунку на 1 пробірку:

 

Таблиця 1

 

ПЛР-буфер

2 мкл

MgCl2

2 мкл

Суміш dNTP (10mM)

0,4 мкл

Tag-полімераза (5ед/мкл

0,2 мкл

H2O

13,4 мкл

 

  1. Внести в пробірки по 2 мкл ДНК, що досліджується. Загальний обсяг реакційної суміші складає  20 мкл.

УвагаДля запобігання контамінації і хибно-позитивних результатів при роботі з зразками рекомендовано використовувати спеціальні наконечники з антиаерозольними фільтрами.

  1. Перенести пробірки в термоблок програмовного термостату і розпочати наступну  програму ампліфікації:

 

95 °C  

12 хв

 

95 °C  

20 сек

35 циклів

 

60-65 °C

20 сек

72 °C

20 сек

72 °C

2 хв

 

       

 

  1. Післе закінчення ампліфікації всі пробірки перенести в кімнату для проведення електрофорезу (детекції) ДНК. Використовувати для аналізу 2-5 мкл ПЛР продукту. Для візуалізації продуктів ампліфікації використовувати 2,5%, агарозний гель. Розділення фрагментів рекомендовано проводити при напруженості 5-7 В/см протягом 30 хвилин.

Обробка результатів аналізу

  1. В деяких пробах (в двох і більше одночасно), маркованих номерами від 1 до 19, повинна бути візуалізована  смужка ДНК чітко визначеної молекулярної ваги, яка визначає алельну специфічність і гетеро- або гомозиготність (табл. 2).
  2. Наявність смужки в негативному контрольному зразку визначається як результат контамінації. При  цьому результати аналізу  повинні бути анульовані.
  3. Наявність слабких смужок жовтого кольору, розташованих нижче або вище специфічних смужок, може бути результатом неспецифічної ампліфікації, які не повинні прийматись до уваги.
  4. Проти лунки для Маркера молекулярної ваги повинні бути візуалізовані полоси вагою 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 и 500 пн за допомогою яких можливо визначити приблизні розміри специфічних смуг (табл. 2).

 

    Таблиця 2.

№ №

Мікс, DR*

Довжина

PCR продукту (пн)  

Ампліфікована

Специфічність

(алель

 або група алелів)

Температура відпалу

Серологічна

специфічність

         1

      255

DRB1* 0101 - 0103

63 °C

   DR 1

         2                   

      197

DRB1* 1501 - 1502

63 °C

   DRw15

         3

      213

DRB1* 1601 - 1602

64 °C

   DRw16

         4

      151

DRB1* 0301 - 0302

61 °C

   DR 3

         5

      217

DRB1* 0301

62 °C

   DRw17

         6

      189

DRB1* 0302, 1302, 1305,  1402, 1403

61 °C

   DRw18

         7

      260

DRB1* 0401 - 0411

62 °C

   DR 4

         8

      232

DRB1* 0701 - 0702

62 °C

   DR 7

         9

      214

DRB1* 0801 - 0804

61 °C

   DRw8

       10

      236

DRB1* 0901

63 °C

   DR 9

       11

      204

DRB1* 1001

60 °C

   DRw10

       12

      176

DRB1* 1101 - 1104

62 °C

   DRw11

       13

      248

DRB1* 1201 - 1202

65 °C

   DRw12

       14

      130

DRB1* 1301 - 1302

61 °C

   DRw13.1

       15

      171

DRB1* 1303 - 1304

63 °C

   DRw13.2

       16

 

      224

      215

DRB1* 1401, 1404, 1405

63 °C

   DRw14.1

       17

      140

DRB1* 1305, 1402, 1403

63 °C

   DRw14.2

       18

      171

      173

DRB3* 0101 - 0301

 

62 °C

   DRw52

       19

      213

DRB4* 0101

60 °C

   DRw53

 

Відгуки для даного товару відсутні

Написати відгук

Ваше Ім’я:



Добре
entry_bads
Ваш відгук:
Добавить фото
Ссылка на фото:
Введіть код, вказаний на зображенні:

© «НЕОГЕН» 2008-2015
Усі права захищено
   
Наші контакти
(044) 332-90-49
  lab.neogene@ukr.net
  lab.neogene