Медична діагностика

Формат набору має ряд переваг:

• надстабільність, всі компоненти набору можна транспортувати при температурі від -20 до +15^оС. Та зберігати протягом 6 місяців
• зменшення контамінації, часу та кількості операцій обслуговуючого персоналу, за рахунок готових до застосування пробірок
• реалізована функція внутрішнього контролю
• наявність барвника для електрофорезу

Протокол  проведення  PCR.

1.    Відібрати відповідну до кількості аналізованих зразків (N), кількість пробірок для ПЛР та дві  додаткові  (контрольна ДНК  HHV-7) та негативий контроль (деіонізована вода або розчинник нуклеїнових кислот).

2.    Промаркувати  пробірки відповідно до аналізованих зразків.

3.    Розставити пробірки у штатив та додати 10 мкл розчинника.

4.    При використанні ампліфікаторів без нагріву кришки поверх суміші накапати по 1 краплі мінерального масла для ПЛР.

5.    На цьому етапі усі вихідні реагенти (решта пробірок для ПЛР, розчин №1, масло) потрібно перемістити  у холодильник з метою уникнення можливої контамінації.

6.    У кожну пробірку, відповідно до нумерації, додати 10 мкл (0,1-0,5 мкг) відповідної проби ДНК, у пробірку негативного контролю додати 5 мкл деіонізованої води. (Об’єм внесеного зразка ДНК залежить від біологічного матеріалу та способу виділення та очистки ДНК.

7.    Провести ампліфікацію ДНК використовуючи наступну програму в точному режимі термоциклера (об’єм – 20 мкл.)

*в залежності від моделі апмпліфікатора, рекомендується оптимізувати температуру відпалу в межах ±2⁰С.

Для перевірки наявності та специфічності продуктів після ПЛР електрофорез провести у 2%  агарозному гелі, приготованому на 1хТБЕ буфері.

8.    У лунки вносити 10 мкл ПЛР продукту. Електрофорез проводити протягом 30 хвилин при напрузі 100 V та сканувати електрофореграму на ультрафіолетовому трансілюмінаторі.

9.    Провести аналіз продуктів реакції. При наявності у зразках ДНК інфекційного агента синтезується фрагмент, вказаний у таблиці відповідно назві агента та фрагмент внутрішнього контролю, а в негативному контролі – відсутні фрагменти ДНК. При відсутності в зразку ДНК інфекційного агента синтезується лише один фрагмент внутрішнього контролю.

10.    Умови зберігання набору. Всі компоненти набору можна транспортувати при температурі від -20 до +15°С. Гарантійний термін зберігання набору при температурі 2-8°С шість місяців з дня виготовлення.

Написати відгук

Ваше Ім’я:

Рейтинг

Добре
entry_bads
Ваш відгук:
Добавить фото

Ссылка на фото:

Введіть код, вказаний на зображенні:

Продовжити